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有關(guān)血清的常見問題

更新時間:2016-06-23      點擊次數(shù):1995

血清是細胞培養(yǎng)中zui重要的元素之一。因此,我們特別整理了一些實驗室里常會遇到的問題,供大家參考:

1. 保存血清的方法?

我們建議血清應(yīng)保存在-5-2O。然而,若存放于4時,請勿超過一個月。若您一次無法用完一瓶,建議您無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。

2. 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?

我們建議您將血清從冷凍箱取出后,先置于28冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地搖晃均勻。

3. 血清解凍后發(fā)現(xiàn)有絮狀沉淀物出現(xiàn),該如何處理?

血清中沉淀物的出現(xiàn)有許多種原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的變性所造成,而血纖維蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解凍后,也會存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但這些絮狀沉淀物,并不影響血清本身的質(zhì)量。

若您欲去除這些絮狀沉淀物,可以將血清分裝至無菌離心管內(nèi),以400g稍微離心,上清液即可接著加入培養(yǎng)基內(nèi)一起過濾。我們不建議您以過濾的方法去除這些絮狀沉淀物,因為它可能會阻塞您的過濾膜。

4. 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學(xué)研究,培養(yǎng)ES細胞,昆蟲細胞和平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。

5. 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質(zhì)量,而造成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察,像是小黑點,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37環(huán)境中,又會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。

因此我們建議您,若非必須,您可以不需要做熱處理這一步。如此一來,不但節(jié)省您寶貴的時間,更確保血清的質(zhì)量!

6. 為什么儲存在冰箱中的胎牛血清會出現(xiàn)沉淀?

胎牛血清沒有預(yù)老化,儲存在28時,血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。這應(yīng)該不會影響血清的質(zhì)量。推薦在-20儲存胎牛血清,避免反復(fù)凍融。

7. 如何避免沉淀物的產(chǎn)生?

我們建議您在使用血清的時候,注意下列的操作:

1

解凍血清時,請按照所建議的逐步解凍法(-204至室溫),若血清解凍時改變的溫度太大(-2037),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。

2

解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。

3

請勿將血清置于37太久。若在37放置太久,血清會變得混濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響血清的質(zhì)量。

4

血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。

5

若必須做血清的熱滅活,請遵守5630分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。

 

8. Qualified Certified 胎牛血清 有什么差別?

Certified 胎牛血清包括了Qualified胎牛血清執(zhí)行的所有的標(biāo)準(zhǔn)檢驗程序,,除了這些標(biāo)準(zhǔn)檢測,Certified胎牛血清還有一些附加的檢測:

        zui終內(nèi)毒素含量的檢測
        噬菌體檢驗
        生物化學(xué)檢測
        激素的檢測
        血紅蛋白檢測
        Sf9 細胞生長促進及方法學(xué)檢測

9. 如何評估ES細胞合格的胎牛血清?

使用D3 ES細胞。這是一個對于胎牛血清中生長促進、生長抑制和分化因子非常敏感的細胞系。

相關(guān)生長效率分析:

當(dāng)ES細胞以非常低的密度傳入包含10%胎牛血清的生長培養(yǎng)基中,檢測啟動和支持ES細胞克隆的能力。

細胞毒分析:

當(dāng)以非常低的密度傳入包含30%胎牛血清的生長培養(yǎng)基中,檢測ES細胞和feeder細胞的生長能力。

相關(guān)形態(tài)學(xué)和分化分析:

檢測胎牛血清支持未分化ES細胞克隆的能力。通過堿性磷酸酶活性評估分化程度。未分化的ES細胞小顏色深紅粉紅,分化的細胞較大,豐滿,顏色較淺。

所有的分析在沒有ESGRO的情況下進行,培養(yǎng)基中出現(xiàn)ESGRO會掩蓋由胎牛血清所導(dǎo)致的問題。(ESGROLIF經(jīng)常用來保持ES細胞處于未分化狀態(tài)。)

培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)大約8批血清中有1批可以用來培養(yǎng)ES細胞

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